干細胞溫和消化酶

簡要描述:
干細胞溫和消化酶專門用于干細胞的消化,包括臍帶間充質干細胞,脂肪間充質干細胞,胚胎干細胞(ES)等。 消化作用極其溫和,對細胞的損害小。

產品描述

干細胞溫和消化酶

【干細胞溫和消化酶   用途與描述】

專門用于干細胞的消化,包括臍帶間充質干細胞,脂肪間充質干細胞,胚胎干細胞(ES)等。
消化作用極其溫和,對細胞的損害小。為目前干細胞臨床研究與臨床應用領域的最新產品。

本產品特別適用于大規模生產干細胞的企業。消除了導致干細胞培養失敗的最大隱患——消化過度問題。
本產品也特別適用于干細胞藥物的研究與開發企業。無任何動物來源組分,成分明確,極大降低了干細胞藥物申報的驗證工作量與申報難度。

【干細胞溫和消化酶   規格與保存】

產品名稱

產品貨號

規格與保存

干細胞溫和消化酶
NC1004.1

500mL/瓶,2-8℃保存,效期12個月

【干細胞溫和消化酶   產品特點】

1. 產品容錯性極好。
即便消化時間長達15分鐘,對干細胞的后續傳代也幾乎沒有影響。減少了對操作人員技能的要求。

2. 即取即用,不需等待。
4℃可穩定保存一年,不再需要-20℃保存。

3. 純人工合成,無任何動物來源組分。
無感染瘋牛病毒(天然牛胰酶)或口蹄疫病毒(天然豬胰酶)的可能性。成分明確,無任何未知的后果。

【干細胞溫和消化酶   產品性能】

 新一代消化產品(溫和消化酶)與傳統消化產品(豬牛天然胰酶)全面對比表

項目類型

細分類別

傳統產品

 新一代產品

消化性能

正常消化
(未消化過度)

細胞活率

85%
95%以上
消化后繼續培養得到的細胞數
1.06x106
1.14x106

超時消化
(消化過度)

細胞活率60%95%以上
消化后繼續培養得到的細胞數0.64x1061.08x106

極端消化
(15分鐘消化)

細胞活率0-10%
90%以上
消化后繼續培養得到的細胞數無法收獲細胞
1.04x106
使用便利程度

消化后是否需要終止?

需要不需要

是否需要-20℃保存?

需要不需要

是否可以即取即用?

不可以可以
使用綜合成本
終止消化的成本

高。
需要使用血清、完全培養基或胰酶抑制劑。

極低。
不需終止消化。 加PBS稀釋即可。

細胞應用前病毒檢測的成本

高。
需檢測豬口蹄疫、牛 瘋牛病等動物病毒。

0成本。
無動物源,所以無需檢測

產品安全性

是否無動物來源組分?

不是

是否可以確知無動物病毒?

不可以可以
細胞藥物申報難度

產品的殘留影響的證明難度

極大。
各種雜質組分不明, 難以證明。

小。
成分明確,均為人工 合成的組分。

 上述數據為接種臍帶來源的MSC的P2代種子細胞,T25培養瓶,接種密度8000 cells/cm2,72小時后消化所得P3代細胞的對應數據。

正常消化(未消化過度)時,溫和酶 確定好于 傳統胰酶。

P2代MSC種子細胞,傳代培養72小時后,分別用溫和酶和傳統胰酶消化,得到P3代MSC細胞,檢測消化后的細胞活率。
P3代MSC細胞繼續培養72小時,分別用溫和酶和傳統胰酶消化,收獲P4代MSC細胞,細胞計數。

細胞數量方面相差不大:溫和酶比傳統胰酶多出 7%。
細胞活率方面相差較大:溫和酶比傳統胰酶高出10%。

對比類別
傳統胰酶
溫和消化酶
P3代MSC細胞活率85%
95%
收到的P4代MSC細胞數量1.06x106cells1.14x106cells

復蘇P2代MSC種子細胞,連續傳代3次,分別用溫和酶和傳統胰酶消化。
細胞數量方面:每一代溫和酶均比傳統胰酶多出 5%-10%。
兩種酶 MSC擴增倍數對比.jpg

4℃可穩定保存一年,不再需要-20℃保存。
干細胞溫和消化酶穩定性監測.jpg

干細胞溫和消化酶在4℃環境下保存14個月,在超過有效期兩個月后,酶活性仍保持在96%。

操作更便利,消化后不需終止消化,PBS稀釋即可。

傳統胰酶消化細胞后,需要額外添加血清,或完全培養基,或胰酶抑制劑,結合胰酶的消化位點,以達到終止消化的目的。
溫和消化酶由于其設計原理,在消化細胞后,不需要終止消化,只需要添加PBS,稀釋消化酶,離心去除即可。極大便利了操作。

成分明確,無任何動物來源組分,更安全。更適合臨床研究、臨床應用或藥物申報用途。

傳統胰酶,取自牛或豬羊的胰臟,經后期純化結晶而得。動物來源與提取工藝決定了傳統胰酶難以避免感染動物病毒,如瘋牛病毒,豬口蹄疫病毒等。因此難以應用于生物制藥與細胞治療等臨床相關領域。
溫和消化酶,為全人工合成酶,消化位點清晰,經原核或真核系統表達,生產過程無任何動物來源組分的引入,所以安全性極高,尤其適用于生物制藥與細胞治療等臨床相關領域。

超時消化(消化過度)時,溫和酶可多收細胞 68%。

分別超時2min消化MSC細胞,后傳代培養72小時,收獲細胞進行計數:
溫和酶收到的細胞數量超出傳統胰酶 68%。且細胞鏡下形態良好。
而經傳統胰酶消化的細胞,培養后鏡下細胞形態雜亂。

兩種酶超時2min消化MSC數據對比.jpg

傳統胰酶延長消化2minMSC照片.jpg傳統胰酶延長消化2min-傳代72h照片.jpg
傳統胰酶延長消化2分鐘,MSC的細胞照片傳統胰酶消化后,傳代72h 后的細胞照片
溫和消化酶延長消化2minMSC照片.jpg干細胞溫和酶延長消化2min-傳代72h照片.jpg
溫和酶延長消化2分鐘,MSC的細胞照片溫和酶消化后,傳代72h 后的細胞照片

 極端消化(消化15分鐘)時,溫和酶基本不受影響。傳統胰酶完全失敗。

分別 15min消化MSC細胞,后傳代培養72小時,收獲細胞進行計數:
溫和酶收到的細胞數量超出傳統胰酶 11倍。且細胞鏡下形態良好。
而經傳統胰酶消化的細胞,培養后鏡下細胞形態雜亂。

兩種酶超時15min消化MSC數據對比.jpg

傳統胰酶延長消化15minMSC照片.jpg傳統胰酶延長消化15min-傳代72h照片.jpg
傳統胰酶延長消化15分鐘,MSC的細胞照片傳統胰酶消化后,傳代72h 后的細胞照片
溫和消化酶延長消化15minMSC照片.jpg干細胞溫和酶延長消化15min-傳代72h照片.jpg
溫和酶延長消化15分鐘,MSC的細胞照片溫和酶消化后,傳代72h 后的細胞照片

客戶問答

Q: 為什么要開發干細胞溫和消化酶產品?

A:消化過度與生長過密是干細胞培養失敗的前兩大原因。在生產級的大規模培養中,消化過度更是一個難以控制的工藝難題。溫和消化酶就是為了解決這個問題而設計的:在該產品的極限消化時間挑戰實驗中,浸潤在溫和酶中長達30min的干細胞,細胞活率均能保持在90%以上,表型正常,且后續傳代正常。

Q:干細胞溫和消化酶的保存溫度條件是2-8℃。我如果-20℃保存,會不會更好?

A:不會更好,會更差。溫和酶是特殊設計的重組蛋白酶產品,蛋白結構穩定,在2-8℃條件下可穩定保存。
若放置-20℃環境,必然涉及反復凍融問題,會導致該重組蛋白酶活性下降,細胞消化時間延長。 


Q:溫和消化酶消化細胞后,需要添加培養基或胰酶抑制劑終止消化過程嗎?

A:不需要。細胞變圓后添加PBS稀釋即可。體積為添加的消化酶的5倍體積,可極大降低用戶使用成本。


Q:在消化時間方面,溫和消化酶與傳統胰酶有什么差別?

A:溫和消化酶消化時間要稍長一些。消化干細胞需要2min左右的時間。


Q:添加完PBS稀釋后,可不離心去除消化酶嗎?

A:不可以。殘留的消化酶會影響后續干細胞的培養過程,會導致干細胞的形態變化。


Q:用無血清培養基及含血清培養基培養的干細胞,在使用溫和酶消化方面有什么異同?

A:相同之處是:無論使用何種培養基,在消化前均需要使用無鈣鎂離子的緩沖液沖洗細胞。
不同之處:如果使用無血清培養基,清洗一次即可。
如果使用血清培養基,必須連續清洗細胞三次,以確保無血清殘留,否則消化時間會變長。

使用說明

暫無使用說明下載

背景知識

傳統的胰蛋白酶是無差別的切割蛋白的精氨酸及賴氨酸C末端形成的肽鍵。消化過程屬于“非特異性消化”。
胰酶只要接觸到細胞,就持續不斷的消化所能接觸的一切蛋白,直至細胞成為碎片。

友康生物專門構建的干細胞溫和消化酶,作用位點清晰,僅特異性消化細胞與細胞之間,以及細胞與培養瓶之間的細胞基質。極少消化細胞外層蛋白。屬于“特異性消化”。
該產品屬于國家發明專利產品。即使干細胞浸潤在溫和酶中15min,細胞活率仍可保持90%以上。