MDCK細胞無血清培養基

簡要描述:
MDCK細胞無血清培養基用于MDCK細胞的傳代培養。 在整個細胞培養過程中,不需添加血清或替代物。 MDCK細胞可直接轉入MDCK細胞無血清培養基培養,不需要經過血清濃度逐步降低的細胞馴化過程。

產品描述

MDCK細胞無血清培養基

 【MDCK細胞無血清培養基   用途與描述】

MDCK細胞無血清培養基是一款專門用于培養MDCK細胞的無血清培養基。

MDCK細胞無血清培養基中不含胎牛血清成分,細胞培養過程中也不需要添加任何血清,無血清培養的MDCK細胞可達到完全培養基
(DMEM+10%FBS)培養的狀態,連續傳代50代,細胞特性無改變,生長速率優于完全培養基。MDCK細胞的倍增時間小于20小時。

MDCK細胞無血清培養基化學成分限定,在流感病毒分離中能排除血清中類淀粉蛋白P等物質對病毒吸附的影響,同時,細胞可以直接
轉入無血清培養基中培養,不需要經過血清濃度逐步降低的馴化過程,能極大的幫助疾控、高校和科研院所的工作人員提高實驗進度。

【MDCK細胞無血清培養基   規格與保存】

產品貨號
產品名稱
產品規格
保存條件
有限期限
NC0201 MDCK細胞無血清培養基 500mL/瓶 2-8℃保存 12個月

【MDCK細胞無血清培養基   使用方法】

MDCK細胞無血清培養基的使用方法跟完全培養基(DMEM+10%FBS)的相同。
不經過血清馴化的MDCK細胞,前5代左右(與MDCK細胞的初始狀態有關)狀態可能會稍差。

1、MDCK細胞復蘇

1)從液氮罐中取出凍存管迅速置于37℃水浴鍋中,使管中的液體在1min內融化。

2)在超凈工作臺中用無菌吸管吸取10mL預溫的MDCK無血清培養基到15mL離心管中,凍存管用75%酒精擦拭表面后,將細胞懸液加入
15mL離心管中,吹吸混勻。

3)800rpm離心3min,去除上清液,用6mL預溫的無血清培養基重懸細胞,接種于T25細胞培養瓶中,接種細胞密度為5×105cells/mL。

4) 37℃,5%CO2 培養箱中培養,次日更換一次培養液,繼續培養1-2天至細胞鋪滿瓶底的80%-90%進行傳代。

2、MDCK細胞傳代(以T25瓶為例)

1)處于對數生長期的細胞長至融合度達到80%-90%時,棄去培養液,用PBS或不含鈣鎂的Hank's液清洗細胞3遍。

2)加入1mL基因重組胰蛋白酶,37℃,5%CO2培養箱中消化至細胞收縮變圓,輕拍培養瓶,鏡下可觀察到細胞移動加入培養基終止消化。

3)如果以1:6比例傳代,加入35mL MDCK細胞無血清培養基。如果以1:4比例傳代,需加25mL MDCK細胞無血清培養基。

4)分瓶后,置于37℃,5% CO2培養箱中培養,細胞長滿瓶底80%-90%后進行下一次傳代(一般2-3天傳代一次)。

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MDCK無血清培養基使用SOP(離心).jpg

3、流感病毒的分離與培養

1) 選取融合度90%-100%且處于對數生長期的MDCK細胞,棄去培養液,用PBS或不含鈣鎂的Hank’s液清洗細胞2-3遍。

2)加入200 μL的流感病毒樣本,溫和搖動數次。

3)置于37℃,5% CO 培養箱中吸附1-2小時。

4)吸出接種物,加入6 mL流感病毒分離無血清培養基(使用前需要添加抗生素及終濃度為2ug/mL的TPCK-胰酶)于培養瓶中,放置
于33℃-35℃,5%CO2 培養箱中培養,每日觀察病變。

5)當75%-100%的細胞出現病變時即可準備收獲病毒。

6)溫和搖動細胞瓶2-3次。將培養瓶中的病毒液置于15mL離心管中。

7)為了提高病毒滴度,可將離心管置于-70度冰箱或液氮上方反復凍融一到兩次。

8)收獲的病毒液可立即進行血凝試驗,或負80度冰箱冷凍長期保存。

4、MDCK細胞凍存

1)選取融合度達80%-90%且處于對數生長期的MDCK細胞用于凍存。

2)依據傳代方法把消化好的細胞收集于離心管并計數,800rpm離心3min。

3)去除上清液,加入商品化的細胞凍存液(凍存液需要提前預冷),凍存液中細胞的最終密度為5×106 cells/mL。用吸管輕輕吹打使
細胞混勻,然后分裝至無菌凍存管中,每支凍存管加液1mL。

4)細胞經過程序降溫后置于液氮中保存。(如用yocon無血清凍存液,無需程序降溫,直接-80℃凍存,12h后存入液氮,長期保存。)

【MDCK細胞培養操作視頻】

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友康版《MDCK細胞復蘇》
友康版《MDCK細胞傳代》
友康版《MDCK細胞接毒》
友康版《MDCK細胞凍存》

【MDCK細胞在MDCK細胞無血清培養基中的狀態】

MDCK細胞在無血清培養基中傳代第10代.jpg MDCK細胞在無血清培養基中傳代第20代.jpg MDCK細胞在無血清培養基中傳代第30代.jpg MDCK細胞在無血清培養基中傳代第32代.jpg
MDCK細胞在無血清培養基
中傳代第10代
MDCK細胞在無血清培養基
中傳代第20代
MDCK細胞在無血清培養基
中傳代第30代
MDCK細胞在無血清培養基
中傳代第32代

客戶問答

1、 用MDCK細胞無血清培養基+流感病毒分離無血清培養基與傳統的DMEM+10%胎牛血清培養細胞相比,病毒侵染時間相同嗎?

答:無血清培養基培養的MDCK細胞,病毒侵染和釋放都較快,病變進程迅速,請及時根據病變程度收獲病毒。

2、 MDCK細胞無血清培養基中含抗生素嗎?

答:MDCK細胞無血清培養基中未添加抗生素,建議使用前添加青鏈霉素溶液(青霉素終濃度為100U/mL,鏈霉素終濃度為100μg /mL)
特別提醒:加入青鏈霉素的培養基,青鏈霉素活性會降解,2-8度保存條件下使用期限不超過三個月。

3、 MDCK細胞擴瓶比例應該是多少?

答:MDCK細胞無血清培養基培養的MDCK細胞擴瓶比例不宜過高,建議不超過1:6,否則可能會出現細胞生長緩慢的情況。使用的MDCK細胞代數不宜超過25代,代數過高會出現細胞生長快,對病毒不敏感等情況,建議更換細胞株。

4、 需要向MDCK細胞無血清培養基中添加L-谷氨酰胺嗎?需要調節pH值嗎?

答:MDCK細胞無血清培養基開瓶即能使用,不需要添加L-谷氨酰胺和調節pH值。

5、 無血清培養基培養的MDCK細胞在傳代時,終止消化后必須要離心嗎?我們實驗室沒有離心機怎么辦?

答:終止消化后,我們建議通過離心去除EDTA-胰酶,防止EDTA-胰酶使細胞出現空泡化或其他生長衰退的情況。
不過您沒有離心機也沒關系,我們有不離心的SOP供您借鑒。
特別提醒:MDCK細胞無血清培養時,禁止消化過度,過度消化會對細胞膜造成損傷,導致后期傳代細胞狀態變差,細胞邊緣不清晰,胞間黑點增多,甚至有可能隨著傳代次數增多,細胞貼壁不緊,甚至細胞飄起,后期無法繼續培養。

MDCK無血清培養傳代-不離心jpg

MDCK無血清培養傳代過程-離心.jpg

使用說明

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背景知識

2015年4月1日,友康生物MDCK細胞無血清培養基產品正式推向市場。我公司為國內首先推出該產品的企業,該產品已獲國家發明專利。

MDCK細胞,中文稱之為犬腎細胞,由于其有著良好的性能,因此多在流感病毒分離中作為宿主細胞使用。MDCK無血清培養基,顧名思義,就是使用中不需要添加血清,生產培養基時也沒有添加血清的培養基產品。實際上是相對于完全培養基而言的,所謂的完全培養基,就是指DMEM+10%血清。MDCK無血清細胞培養基產品用于MDCK細胞的傳代與培養,可以完全替代原有的DMEM+10%血清的使用方法。

作為一家成立9年的企業,也是一家深耕疾控系統9年的企業,我們或許比其他人更能深刻的理解用戶的需求。MDCK細胞,作為中國各級疾控系統用于流感病毒分離的宿主細胞,在全國流感監測網絡中的病毒分離工作中起著基礎的作用。常規的DMEM+10%血清的培養MDCK的方法,存z在幾個不便:一是使用不便。血清需要-20度保存,因此每次使用需要先融化血清。而培養基僅需要4度保存。因此,每次細胞培養總要經歷令人心煩的等待過程;二是效果不穩定。血清是公認的批間差極大的產品。所以很多人干脆適應了一下子訂購同一批號的很多血清,一直用到失效扔掉。也不愿意同時使用2個批號的產品,因此批間差太大了。而無血清培養基恰恰沒有這兩個問題:一是保存溫度4度,即用即取,不需等待;一是批間差穩定,因為培養基的組份均為化學成分確定的穩定物質,想有批間差也難。

我公司在深刻理解客戶需求的基礎上,開發出了這款為疾控客戶量身定制的產品:
在產品使用方面:與原有使用方法完全一致,不需進行任何培訓;
在細胞形態方面:與完全培養基培養的細胞形態一致,沒有重新適應細胞形態的擔心;
在傳代次數方面:可從2代穩定的傳導50代以上,被病毒侵染能力未見下降。
在使用便利方面:不需要進行細胞馴化,直接將凍存的細胞放入其中復蘇即可使用。

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